Nr contract: 374 PED din 23/10/2020 (PN-III-P2-2.1-PED-2019-3103)
Rezumatul proiectului
Microgliile sunt celule immune rezidente din sistemul nervos central (SNC). In SNC sanatos, microgliile nu sunt inactive, ci scaneaza mediul extracelular prin intermediul ramificatiilor care se extind si se retracta fara deplasarea corpului celular. Dupa o leziune in SNC sau sistemul nervos periferic, microgliile se activeaza rapid: corpul celular se mareste, ramificatiile proximale se ingroasa, prelungirile distale nu mai sunt la fel de ramificate, pe membrane apar niste modificari specifice numite ruffles si celulele se misca spre zona lezata unde incep sa manifeste o activitate fagocitara crescuta si eliberare de mediatori pro-inflamatori cu scopul de restabili homeostazia creierului. Iba1 este o proteina de citoschelet exprimata specific doar in microglii si macrofage unde actioneaza ca o proteina de legatura a filamentelor de actina. Intr-un studiu anterior am aratat ca dupa silentierea proteinei Iba1 in linia de microglii BV2 cu un siRNA anti-Iba1 specific, procesele de migratie, proliferare si adeziune celulara au fost reduse semnificativ, in timp ce alte activitati care implicau citoscheletul si potential proteina Iba1, cum ar fi fagocitoza si functionarea receptorilor P2x7, au fost semnificativ crescute. In acest studiu intentionam sa investigam daca siRNA anti-Iba1 personalizat pe care il avem este la fel de eficient pentru silentierea proteinei Iba1 si in microgliile umane. Toate experimentele pe microglii umane vor fi realizate pe linia celulara de microglii umane HMC3 si vor fi dublate de experimente similare pe culturi primare de microglii de la sobolan ce vor fi folosite ca model de referinta. Silentierea Iba1 in microgliile umane ar putea fi relevanta pentru afectiuni ale SNC asociate cu activare crescuta a microgliilor.
⤓ PDF: Descarcă rezumatul proiectului
Obiectivele proiectului
PACHET DE LUCRU#1 Investigarea eficientei silentierii proteinei Iba1 in microgliile umane
Obiectiv 1.1 Caracterizarea fenotipului microgliilor umane HMC3 in conditii de cultura fara FBS.
Obiectiv 1.2 Investigarea eficacitatii silentierii proteinei Iba1 in microglii umane HMC3 si microglii primare de sobolan.
PACHET DE LUCRU#2 Investigarea consecintelor functionale ale silentierii proteinei Iba1 in microgliile umane
Obiectiv 2.1 Investigarea prin teste asociate cu citoscheletul (i.e migratie, adeziune celulara, fagocitoza) a consecintelor functionale ale silentierii proteinei Iba1 in microglii primare de sobolan si microglii umane HMC3 +/- activate cu LPS.
Obiectiv 2.2 Investigarea prin teste de activare (i.e expresia marker-ilor M1 si M2, dozarea de citokine & chemokine) a consecintelor functionale ale silentierii proteinei Iba1 in microglii primare de sobolan si microglii umane HMC3 +/- activate cu LPS.
Obiectiv 2.3 Investigarea prin teste asociate cu receptorii P2x7 a consecintelor functionale ale silentierii proteinei Iba1 in microglii primare de sobolan si microglii umane HMC3.
Rezultate estimate
Estimam ca in urma acestui studiu vom putea confirma daca intr-adevar proteina de citoschelet Iba1 poate fi o tinta terapeutica in microgliile umane. In experimentele anterioare, folosind tehnologia ARN de interferenta am observat influente semnificative asupra proceselor de migrare, de fagocitoza sau asupra functionarii receptorilor P2x7 intr-o linie celulara de microglii de soarece dupa silentierea proteinei Iba1. Deoarece exista un mare grad de similitudine in structura genei de codifica proteina Iba1 intre soareci/sobolani si om, ne asteptam sa observam efecte asemanatoare atat in microgliile in cultura primara izolate de la sobolan, cat si pe o linie celulara de microglii umane HMC3.
Institutia coordonatoare
UNIVERSITATEA BUCURESTI, Adresă: Șoseaua Panduri, nr. 90,Sector 5, 050663, Bucureşti, sector 5, 050663, Bucureşti, Fax: +4021-313-1760, email: Această adresă de email este protejată contra spambots. Trebuie să activați JavaScript pentru a o vedea.
Autoritatea contractanta (finantatoare a proiectului)
Unitatea Executivă pentru Finanţarea Învăţământului Superior, a Cercetării, Dezvoltării şi Inovării (UEFISCDI), cu sediul în Bucureşti, Str. D. I. Mendeleev nr. 21-25, sector 1, cod poştal: 010362, tel 021 3023850, fax. 021 3115992
Durata proiectului: 24 luni
Bugetul proiectului: 600 000 lei de la bugetul de stat
Datele de contact ale directorului de proiect:
Universitatea Bucuresti
Facultatea de Biologie
Departamentul de Anatomie, Fiziologie Animala si Biofizica
Splaiul Independentei 91-95, sector 5, Bucharest
Romania
Tel: 0040-21-3181574
Fax: 0040-21-3181573
Email: Această adresă de email este protejată contra spambots. Trebuie să activați JavaScript pentru a o vedea.
Echipa proiectului:
- Ristoiu Violeta Paula
- Gheorghe Roxana
- Deftu Alexandru
- Matanie Cristina
- Ghenghea Mihai
- Gabriela Chiritoiu
- Marioara Chiritoiu
- Cristian Munteanu
